实验计划表

导论

第一节 基因工程的四大要素

第二节 基因克隆的策略

1核酸的提取与检测

1-1 基因组DNA的提取

1-2 总RNA和mRNA的提取

1-3 噬菌体DNA的提取

1-4 质粒DNA的提取

1-5 核酸的检测

1-6 脉冲场凝胶电泳

1-7 宏基因组文库的构建

2靶基因的获取

2-1 PCR扩增

2-2 目的基因片段的获取

2-3 探针的标记及检测

2-4 核酸探针筛选基因文库

2-5 反转录PCR

2-6 RACE方法

2-7 反向PCR

2-8 SiteFinding-PCR

2-9 功能基因的活性筛选

3基因定点突变、沉默与敲除

3-1 基因定点突变

3-2 基因沉默技术

3-3 酵母基因的敲除

3-4 哺乳动物基因的敲除

3-5 植物基因的敲除

4质粒的重组

4-1 T-A克隆

4-2 感受态细胞的制备

4-3 重组质粒的转化

4-4 阳性克隆的筛选

4-5 DNA序列测定与序列同源性分析

5原核表达系统的构建与诱导表达

5-1 DNA的酶切反应

5-2 靶DNA片段的分离纯化

5-3 DNA片段的连接

5-4 表达质粒的构建

5-5 Southern印迹

5-6 靶基因的诱导表达

5-7 SDS-PAGE

6真核表达系统的构建与表达

6-1 外源基因在酵母中的表达

6-2 外源基因在哺乳动物细胞中的表达

6-3 外源基因在植物细胞中的表达

6-4 qRT-PCR分析

6-5 Northern印迹

6-6 Western印迹

6-7荧光原位杂交

7蛋白质的分析与目标产物分离

7-1 免疫荧光与激光共聚焦

7-2 双向电泳

7-3 酵母双杂交

7-4 蛋白质浓度的测定

7-5 亲和层析

参考文献

附录1 名词缩写

附录2 实验操作及仪器使用注意事项

附录3 如何撰写实验报告

附录4 常用碱基、氨基酸符号及缓冲液

附录5 大肠杆菌基因型

附录6 实验仪器