第一篇 酶学篇

第一章 基因工程核酸酶简介

第一节 基因工程核酸酶概况

第二节 基因工程核酸酶

一、锌指核酸酶

二、归巢核酸酶

三、TALE核酸酶

四、CRISPR/Cas

五、三种核酸酶在基因治疗领域的比较

第二章 归巢内切酶

第一节 归巢内切酶概况

第二节 归巢内切酶

一、归巢内切酶家族

二、归巢内切酶剪切机制

三、归巢内切酶克隆与组装

四、归巢内切酶在基因操作和重组中的应用研究

第三章 利用锌指核酸酶技术的基因治疗研究进展

第一节 锌指核酸酶概况

第二节 ZFN作用原理

第三节 ZFN的应用和限制

第四节 ZFN构建的技术改进

一、ZFP结合域技术改进

二、报告、筛选系统改进

三、Fok Ⅰ切割结构域技术改进

四、ZFN定点修饰技术改进

五、ZFN转染细胞技术改进

六、脱靶位点检测改进

第四章 TALE文库构建与TALENs相关基因治疗研究

第一节 TALENs简介及研究背景

一、TALENs简介

二、TALENs的基因治疗作用

三、TALENs的应用价值

第二节 国内外研究现状和发展趋势

一、遗传病基因治疗的现状和发展趋势

二、基因剪辑的现状和发展趋势

三、TALENs克隆及基因剪辑效率和特异性研究现状与发展趋势

四、TALENs的应用研究进展和趋势

第五章 反因子核酸酶的设计与组装

第一节 TALE密码、晶体结构与应用

一、TALE密码

二、TALE晶体结构

三、TALE的应用

第二节 TALENs靶点的设计和合成方法

一、TALENs靶点的设计

二、TALENs组装构建方法

第六章 反因子核酸酶活性检测

第一节 luciferase SSA法

第二节 细胞内源基因突变率检测法

一、非配对内切酶法-T7E1法或Cel Ⅰ法

二、限制性内切酶法

第三节 融合荧光法

第四节 原核蓝/白与白/蓝系统法

第七章 高通量测序技术在反因子核酸酶酶活性与脱靶效应检测中的应用

第一节 反因子核酸酶概况

第二节 反因子核酸酶活性与脱靶效应检测

一、反因子核酸酶的构建与表达

二、反因子核酸酶作用后的突变分析

三、高通量测序技术在反因子核酸酶活性与脱靶效应检测中的优越性

第二篇 技术篇

第八章 反向遗传学在斑马鱼研究中的应用

第一节 反向遗传学在斑马鱼研究中的技术概况

第二节 靶基因的筛选

第三节 MO基因敲降

第四节 反向遗传工具的基因组大范围筛选

一、反转录病毒插入

二、TILLING

第五节 ZFN

第六节 TALEN——最具前景的反向遗传学工具

一、TALE的组成

二、TALEN靶位点的选择

三、人工构建TALE重复序列的策略

四、TALEN诱变的检测方法

五、TALEN技术的应用

六、TALEN技术的待解决问题

第七节 CRISPR/Cas9系统

一、CRISPR/Cas9的起源

二、CRISPR/Cas9系统的工作原理

三、CRISPR/Cas9系统的优点

四、设计CRISPR/Cas9系统的原则以及操作事项

五、CRISPR/Cas9系统的应用

第八节 总结与展望

第九章 反因子核酸酶（TALENs）在果蝇基因组修饰中的应用

第一节 修饰果蝇基因组的常见技术

一、转座元件介导的基因组突变

二、同源重组介导的基因打靶

三、phiC31定点整合酶介导的多重基因打靶

四、锌指核酸酶介导的基因组修饰

第二节 转录激活因子样效应蛋白的生物学性质

第三节 TALENs介导的基因组操作技术在果蝇中的工作原理

一、构建TALEs

二、构建TALENs及其体外转录获得mRNAs

三、可遗传突变的获得和插入缺失突变的分析

第四节 TALENs在果蝇中的应用案例分析

第五节 TALENs在果蝇中应用的优势和展望

第十章 反因子核酸酶用于人类疾病模型的建立

第一节 人类疾病模型简介

第二节 应用反因子核酸酶建立人类疾病模型的优势

第三节 应用反因子核酸酶建立人类疾病模型的实例（研究进展）

第三篇 应用篇

第十一章 基因治疗

第一节 基因治疗的适应证

一、遗传性疾病

二、肿瘤

三、病毒性感染疾病

第二节 基因转移的基本方法

一、质粒体DNA直接注射法

二、脂质体介导的基因转移

三、腺病毒与腺相关病毒作为基因转移的载体

四、其他病毒载体

第十二章 反因子核酸酶靶向编辑HER-2基因的可行性评价

第一节 研究背景

一、乳腺癌基因治疗研究的独特社会和生物医学价值

二、HER-2作为乳腺癌基因治疗的生物靶标

三、新型基因剪辑技术靶向剪切目标序列应用于乳腺癌基因治疗的可行性

第二节 研究内容

第三节 项目的特色与创新之处

一、基因技术

二、肿瘤治疗

第四节 技术路线图

第十三章 多模态成像监测EGFR基因特异性TALENs治疗非小细胞肺癌可行性研究

第一节 肺癌治疗现状

第二节 TALENs靶向EGFR基因治疗肺癌的实验方案

第十四章 基因编辑技术敲除雄激素受体治疗前列腺癌的多模态成像评价

第一节 前列腺癌治疗现状

第二节 TALENs靶向雄激素受体基因治疗前列腺癌的实验方案

第十五章 TALENs基于抗肌萎缩蛋白基因44号外显子缺失的基因治疗策略

第一节 工程核酸酶TALENs在基因治疗中的潜力

第二节 治疗障碍及DMD的临床特征

第三节 多基因治疗策略：从DMD转变为BMD的可能性

第十六章 反向基因治疗优势

第一节 基因失活的价值

第二节 未来的期望——治愈部分疾病

第三节 反向基因组学与基因治疗

附录一 CCR5与艾滋病的防治

附件二 相关英文文献