人和哺乳动物细胞基因组DNA制备法

一、从培养物和组织细胞中提取DNA

二、从人全血细胞中提取基因组DNA

从真核细胞中抽提总RNA

一、异硫氰酸胍-超离心法

二、NP40法

三、胍酚氯仿法

制备高纯度mRNA—寡脱氧胸苷纤维素柱层析法

制备高纯度mRNA-寡脱氧胸苷乳胶法

寡聚脱氧胸苷纤维素柱精制mRNA

质粒DNA的提取

氯化铯密度梯度超离心提取质粒DNA

噬菌体DNA的制备和纯化

小量酵母DNA制备法

聚合酶链反应技术

聚合酶链反应-单股构型多态性方法

反转录聚合酶链反应法

原位杂交技术

缺口平移和多头引物

缺口平移法制备α-32P标记的探针

随机引物法制备α-32P-dNTP标记DNA探针

末端标记法

琼脂糖凝胶电泳

DNA连接前的脱磷反应

一、脱磷反应Ⅰ

二、脱磷反应Ⅱ

DNA序列分析

DNA酶Ⅰ“足迹”法

核失控转录测定法

分离酵母人工染色体插入片段

人基因组限制性酶切片段的制备和分离

DNA的部分酶解

哺乳动物细胞基因的导入

一、磷酸钙共转染法

二、DEAE-葡聚糖法导入基因

三、脂质转染

四、电穿孔法

融合蛋白表达及其多克隆抗体的制备

附一

附二

Southem印迹杂交

用Southem印迹法分析DNA分子上的DNA酶Ⅰ高敏感位点

Northern印迹杂交

感受态细菌制备及转化实验

cDNA的合成和克隆

一、单链cDNA的合成

二、双链cDNA的合成

三、核酸酶S1消化双链cDNA

四、核酸酶S1消化产物的分离——蔗糖密度梯度离心法

五、双链DNA加尾

七、转化

六、退火

λgtll cDNA文库扩增及免疫法筛选

一、文库扩增

二、免疫筛选λgtll cDNA文库

十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳和Western印迹

一、十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳

二、Western印迹

一、35S-甲硫氨酸标记

35S和32P标记细胞

二、32P-正磷酸盐标记

附录一 常用试剂配制

附录二 有关技术

附录三 名词解释

附录四 限制性内切酶的使用方法说明

附录五 常用限制酶识别序列

附录六 遗传密码

附录七 氨基酸符号及密码子

附录八 相关技术资料