译者的话

1．分子生物学基础

前言

致谢

2．分子生物学家的工具

3．使用本手册的准备工作、步骤和注意事项

3-1 本手册的使用

3-2 应注意的安全问题

3-3 分子生物学研究所需的仪器设备

4．克隆载体与细菌细胞

4-1 pBR322

4-2 M13

4-3 pUC

4-4 λgt10

4-5 λgt11

4-6 EMBL 3和EMBL 4

4-7 Charon 28

4-8 细菌菌株

5．从真核细胞中制备DNA

5-1 快速制备DNA

5-2 从真核细胞中制备DNA的常用方法

5-3 从培养细胞和组织中制备DNA

5-4 限制性内切酶及其使用

5-5 琼脂糖凝胶电泳

5-6 Southern印迹

6．用标记的合成探针检测核酸

6-1 制作DNA合成探针：一般描述

6-2 合成探针的末端标记

6-3 用(32)P末端标记的合成探针作杂交

7-1 切口平移

7．用来源子质粒的探针探测核酸

7-2 DNA杂交(Southern印迹杂交)

8．质粒DNA制备

8-1 细菌转化

8-2 质粒DNA制备：Triton-溶菌酶法

8-3 大量提取的碱裂法：质粒纯化

8-4 质粒的“小量制备”法

9．DNA限制酶切片段的制备

9-1 小凝胶

9-2 酶切后分析DNA限制酶切片段：琼脂糖凝胶电泳

9-3 电泳洗脱

9-4 DNA限制酶切片段的聚丙烯酰胺凝胶电泳

10-1 精胺纯化DNA

10．纯化DNA

10-2 玻璃粉末洗脱DNA

10-3 DNA纯化的其他方法

11．真核细胞RNA的制备和分析

11-1 异硫氰酸胍制备总RNA

11-2 RNA的制备：微量法

11-3 用寡聚脱氧胸苷纤维素选择Poly(A~+)RNA

11-4 甲醛凝胶电泳分离RNA和Northern印迹

11-5 标记探针和DNA或RNA样品的点渍印迹杂交

11-6 RNA凝胶印迹探测：概述

11-7 从克隆在质粒中的DNA制备RNA探针

12．制备噬菌体克隆DNA

12-1 噬菌体的生长和制备

12-2 噬菌体DNA的大量制备和纯化

13-1 克隆真核生物基因组DNA：导论

13．克隆真核生物基因组DNA

13-2 基因组DNA的制备：Mbo I部分酶解法

13-3 制备基因组克隆化用的噬菌体载体

13-4 基因组DNA与噬菌体臂连接和包装以构建文库

13-5 包装的文库效价测定及涂平板培养

13-6 用放射性标记探针筛选已倒平板的文库

13-7 文库扩增

14．cDNA克隆进λgt10和λgt11

14-1 cDNA克隆载体λgt10和λgt11的制备

14-2 从真核生物mRNA生成cDNA插入片段

14-3 cDNA文库用λgt10或λgt11的臂连接并加以包装

14-4 已包装的含插入片段的λgt10和λgt11倒平板和筛选

14-5 从λgt10和λgt11cDNA克隆制备DNA

15-1 用质粒作亚克隆：总则

15．用质粒作亚克隆

15-2 制备pBR322质粒以供亚克隆和与插入片段连接

15-3 pBR322菌落杂交

15-4 亚克隆在pUC质粒上

16．M13克隆和顺序测定

16-1 M13克隆和顺序测定：总则

16-2 制备供克隆化的专一限制酶切片段

16-3 BAL31核酸外切酶连续缺失法制备供M13克隆比的插入片段

16-4 M13载体的制备和插入片段与载体的连接

16-5 M13对JM103大肠杆菌宿主的转化

16-6 用放射性标记探针筛选M13克隆选出待测顺序的插入片段

16-9 制备作顺序分析用的单链M13DNA

16-8 M13克隆的单行筛选分析

16-9 聚丙烯酰胺顺序分析凝胶的制备

16-10 M13克隆的顺序分析

17-1 S_1核酸酶保护测定

17．克隆DNA的进一步鉴定

18．转染离体培养的哺乳动物细胞

18-1 用纯化的质粒进行粘着细胞和非粘着细胞的磷酸钙转染

18-2 非粘着和粘着哺乳动物细胞的DEAE葡聚糖介导的转染

18-3 电穿孔

18-4 选择转染的哺乳动物细胞：G418法

18-5 氯霉素乙酰转移酶(CAT)分析

19．蛋白质方法

19-1 体外翻译和免疫沉淀

19-2 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

19-3 Western印迹分析

19-4 用于蛋白质或RNA的银染凝胶

20．常用方法

20-1 DNA/RNA的抽提和沉淀

20-2 塑料袋的封口

20-3 光密度的分析测定

20-4 凝胶拍照或放射自显影

20-5 放射自显影

20-6 制作细菌生长的平板

20-7 噬菌体的效价测定和涂布

21．专用方法

21-1 转基因小鼠的制备

21-2 单克隆抗体的产生：杂交瘤融合

21-3 用标记探针对组织切片作原位杂交

21-4 酵母菌为受体的克隆化

附录Ⅰ 贮存溶液

附录Ⅱ 酶

附录Ⅲ 试剂和仪器供应商

索引