1 概论

短期试验

一组试验的必要性

试验项目的选择

2 鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复突变试验(Ames试验)

菌株的基因型及生物学特性的测试

操作

组氨酸缺陷型(his~-)

深度粗糙突变(rfa)——结晶紫抑菌试验

氨苄青霉素/四环素平板

R因子——抗氨苄青霉素试验

AuvrB突变——紫外线敏感试验

自发回复突变(his~+)

回变特性——诊断性试验

测试菌株的保藏和应用

常用试剂及培养基的配方

常用试剂

营养肉汤

营养肉汤琼脂培养基

改良Vogel—Bonner(V—B)10E

顶层软琼脂

最低营养V—B培养基

组氨酸/生物平板

氨苄育霉素平板

0.5mM L—组氨酸/0.5mM D—生物系溶液

0.2M磷酸钠缓冲液

哺乳动物肝S9的制备及应用

诱导方法和S9的制备

合并诱导方法

S9混合液的配制

受试化学物

诱变试验操作与结果判断

溶剂

斑点试验(Spot test)与阳性判断依据

平板掺入试验车阳性判断标准

假阳性与假阴性

平板掺入试验的发展

预培养法

干燥器内试验法

尿中诱变剂的俭出

其他辅助因子的补给

波动试验

菌株

试剂、贮存液及培养液的配制

操作程序

试验结果的统汁评价

安全预防措施

附录

肝匀浆S9组分蛋白质含量测定

肝匀浆S9组分细胞色素P—450测定

细胞色素P—450芳烃羟化酶(AHH)活性测定

3 大肠杆菌营养缺陷型回复突变试验

菌株

菌株基因型鉴定

色氨酸需要

乳糖、硫胺素需要

△uvrA/B——紫外线敏感试验

R因子——氨苄青霉素敏感试验

回变特性

自发回变

菌种保藏

悬液深低温

主要培养基和溶液的配制

营养肉汤培养基、营养肉汤琼脂培养基、半固体培养基、Davis—Mingioli盐液的配制

20％葡萄糖水溶液

20％乳糖水溶液

5mg％硫胺素水溶液

0.1％L—色氨酸水溶液

10％酪蛋白水解物水溶液

定期移植

选择培养基顶层

选择培养基底层

4倍稀释D—M盐溶液

生长培养液

肝微粒体的应用

检品的配制和预试

试验方法

点试及操作步骤

平板掺入法及操作步骤

对本试验的评价

平板掺入法

数据处理与结果分析

点试法

4 大肠杆菌DNA聚合酶缺陷型修复试验

菌株的性状鉴定和菌种保藏

培养基和溶液的配制

HA＋T琼脂培养基

贮存盐溶液

肝微粒体的应用

HA＋T液体培养基

HA＋T软琼脂培养基

受试物的配制和对照试剂

试验方法

标准纸片扩散法及其操作步骤

平板掺入法及其操作步骤

液体法及其操作步骤

结果判断和数据处理

对本试验的评价

5 枯草杆菌重组缺陷型重组试验

特性鉴定

菌种保藏

培养基和溶液的配制

B—2肉汁培养基

B—2肉汁琼脂培养基

“干燥”平板制备

改良的Schaeffer培养基

B—2肉汁软琼脂培养基

50％(W/V)甘油水溶液

M/15磷酸盐缓冲液

缓冲盐溶液

肝微粒体在试验小的应用

受试物的配制和对照试剂的选择

试验方法

划线法

芽胞法

液体法

结果判断和数据处理

菌株的性状鉴定和菌种保藏

对本试验的评价

6 哺乳类细胞DNA损伤的检测

原理

碱性蔗糖梯度沉降试验

操作步骤

碱性洗脱试验

原理

操作步骤

7 哺乳类细胞DNA修复反应的检测

DNA损伤的切除修复及其检测

等密度梯度沉降试验

原理

操作步骤

溴尿嘧啶光解试验

原理

操作步骤

程序外DNA合成(UDS)试验

原理

UDS放射自显影显示法的操作步骤

UDS液体闪烁计数显示法的操作步骤

原理

实验步骤

DNA合成抑制试验

8 哺乳类细胞诱变试验

野生型细胞的选择

CHO细胞系

V79细胞系

L5178Y细胞系

人二倍体成纤维细胞

常用基因座位的特征

h9prt座位

质膜Na~+/K+ATP酶座位(乌本苷耐受性)

tk座位

白喉毒素耐受座位(dip~r)

实验设计模式和影响实验结果的因素

自发突变率

突变表现型的“表达时间”

代谢协同作用与选择时的细胞密度

集落分裂

其他

V79(CHO)/hgprt系统

几个哺乳类细胞诱变试验系统

V79/oua~r系统

HF/dip~r系统

L5178Y(tk~+/tk~-)/tk系统

9 细胞转化试验

SHE细胞转化试验

SHE细胞的分离及冷冻贮存

检测步骤

C3H/1CT1/2及BALB/C—3T3细胞系系统

检测步骤

细胞系的培养和贮存

BHK—21/软琼脂系统

BHK—21/C1—?3的培养条件

检测步骤

·附录·细胞培养基本技术

10 体细胞染色体畸变试验

体外染色体畸变的试验

细胞株的测试

人外周血细胞染色体畸变试验

取样时间

给药次数、途径与剂量

动物选择

体内骨髓细胞染色体畸变试验

制片步骤

染色体畸变分析

染色体数目的变化

染色体结构的变化

11 微核试验

哺乳动物骨髓嗜染红细胞(PCE)微核试验

细胞群的选择

动物选择

剂量及分组

给药方式及制片时间

对照组

制片方法

染色

嗜多染红细胞及微核计数

数据处理

结果评价

哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验的优缺点

原理

胚胎转移微核试验

试验方法

讨论

其他细胞微核试验

哺乳动物减数分裂细胞的微核试验

肝细胞微核试验

细胞培养微核试验

小鼠睥脏微核试验

外周血微核试验

与SCE同时进行微核试验

12 姊妹染色单体交换试验

原理

哺乳类细胞体外SCE试验

哺乳类动物体内SCE试验

实验设计

BUdR的预处理

操作步骤

统计处理及结果评价

SCE方法的优缺点

SCE的基线频率

13 睾丸染色体畸变试验

精子发生过程

试验方法

动物

给药剂量及途径

精原细胞畸变观察

初级精母细胞畸变观察

精子畸形试验与致癌性的关系

14 精子畸形试验

动物

给药和剂量

对照

精子采样与检查

精子畸形试验方法

统计分忻与评价

精子畸形与诱变性的关系

特异座位试验

可遗传易位试验

显性致死试验

小鼠精子畸形试验的灵敏度和特异性

精子试验的优缺点

有待进一步研究的问题

15 显性致死试验

原理

试验方法

动物选择

剂量、动物分组及给药方式

交配方法

结果统计分析

胎仔检查

结果判断

讨论

16 果蝇伴性隐性致死试验

试验方法

原理

果蝇

预试

阳性和阴性对照

样本的大小

给予受试物

交配程序

结果的判断、统计处理及评价

结果的判断标准

统计处理及评价

注意事项

对方法学的评价

应用及发展概况

17 致畸试验与生殖毒性试验

有关致畸的基本概念

致畸性

胚胎毒性

母体毒性

畸形和畸胎发生

致畸指数

影响畸胎发生的因素和致畸机理

发育阶段

遗传的感受性

化学物的剂量

化学物的理化性质

致畸机理

美国的生殖毒性试验规范

FDA的两代生殖试验结合致畸试验

FDA的三代生殖试验结合致畸试验

FDA的致畸试验要点

FDA的三段致畸试验

EPA的禽类生殖试验

大鼠致畸试验

我国的生殖毒性试验方案

喂养生殖试验结合致畸试验

生殖毒性试验的发展

18 诱癌试验

实验动物

动物种属和品系的选择

动物的需要量

动物的饲养管理

经口给药

经皮肤给药

给药途径

腹腔内注入

静脉内注入

呼吸道给药

预备试验

急性试验

两周重复给药试验

亚慢性试验

动物随机分组

诱癌试验实施方法

动物的自发性肿瘤

给药剂量和实验时限

日常观察和处理

病理学检查

诱癌试验结果的评价

肿瘤的发生率

诱癌试验阳性的判断标准

提高诱癌试验敏感性的措施

经胎盘诱癌试验

新生动物中诱癌