目 录

前 言

1 分子生物学基础

2 分子生物学家的实验方法

3 使用本书的一般准备、步骤及注意事项

§3.1如何使用本书

§3.2安全注意事项

§3.3分子生物学研究所需要的设备

4 克隆载体与细菌细胞

§4.1 pBR322

§4.2 M13

§4.3 pUC

§4.5 λgt11

§4.4 λgt10

§4.6 EMBL3和EMBL4

§4.7 Charon28

§4.8细菌菌株

5 真核细胞DNA的制备

§5.1 DNA的快速制备

§5.2真核细胞DNA的制备——一般方法

§5.3培养细胞和组织的DNA制备

§5.4限制性核酸内切酶（REs）及其应用

§5.5琼脂糖凝胶电泳

§5.6 Southern印迹

6 用标记的合成探针探测核酸

§6.1制备合成DNA探针——总论

§6.2合成探针的末端标记

§6.3用合成的32P末端标记探针进行杂交

§7.1 缺口转译

7 用质粒源性探针探测核酸

§7.2 DNA杂交（Southern印迹杂交）

8 质粒DNA的制备

§8.1细菌的转化

§8.2质粒DNA制备：三硝基甲苯—溶菌酶

（Triton—Lysozyme）法

§8.3大规模碱裂解法：质粒纯化

§8.4质粒“微量制备”法

9DNA内切酶片段的制备

§9.1微型凝胶（Minigels）

§9.2酶切后DNA片段的分析

——琼脂糖凝胶电泳

§9.3 电洗脱

§9.4 DNA限制性片段的聚丙烯酰胺凝胶电泳

§10.1 DNA的精胺纯化法

10 DNA的纯化

§10.2 DNA的玻璃粉洗脱

§10.3 DNA的纯化：其它方法

11 真核细胞RNA的制备和分析

§11.1用喹尼丁异硫氰酸盐制备细胞总RNA

§11.2微量RNA制备法

§11.3用Oligo（dT）纤维素柱制备Poly（A+）RNA

§11.4福尔吗啉凝胶电泳分离RNA和Northern印迹分析

§11.5用标记的探针“打点”杂交检测DNA或RNA

§11.6 RNA杂交时一般注意事项

§11.7体外转录克隆到质粒中的DNA插入片段制备RNA探针

12 噬菌体克隆DNA的制备

§12.1噬菌体的扩增与制备

§12.2噬菌体DNA的大量制备与提纯

13 从真核细胞基因组中克隆DNA

§13.1概述

§13.2 DNA制备： MboI部分消化法

§13.3基因克隆的噬菌体载体的制备

§13.4连接基因组DNA和噬菌体的臂、包装、构建基因文库

§13.5基因文库的滴度测定和平皿试验

§13.6用放射性标记的探针筛选基因文库

§13.7基因文库扩增

14 用λgt10和λgt11克隆cDNA

§14.1制备cDNA克隆载体——λgt10和λgt11

§14.2从真核细胞mRNA制备cDNA插入片段

§14.3λgt10或λgt11臂的连接、包装与cDNA

文库的构建

§14.4包装后的重组λgt10和λgt11的平皿接种

与筛选

§14.5 λgt10和gt11cDNA克隆DNA的制备

15 用质粒载体进行亚克隆

§15.1用质粒载体进行亚克隆：总则

质粒的制备

§15.3 pBR322集落杂交

§15.4用pUC质粒载体进行亚克隆

16 M13克隆与序列分析

§16.1 M13克隆及序列分析：概况

§16.2用内切酶制备克隆插入片段

§16.3用BAL31外切核酸酶连续删节法制备M13克

隆插入片段

§16.4 M13载体制备及载体与插入片段的连接

§16.5用M13转化大肠杆菌JM103

§16.6用放射性探针筛选M13克隆挑选插入片段作序列分析

§16.7制备M13单链DNA用于序列分析

§16.8 M13克隆的单道（Sinle-lane）筛选

§16.9聚丙烯酰胺序列分析凝胶的制备

§16.10 M13克隆序列分析

17 克隆DNA的进一步定性

§17.1 S1核酸酶保护试验

18 哺乳动物体外培养细胞的转染试验

§18.1用纯化质粒进行悬浮细胞和贴壁细胞转染的磷酸钙沉淀法

§18.2 DEAE葡聚糖介导的哺乳动物悬浮细胞和贴壁细胞的转染试验

§18.3电导入（Electroporation）

§18.4转染后哺乳动物细胞的选择——G418选择方法

§18.5氯霉素乙酰转移酶试验（CAT试验）

19 蛋白质的分析方法

§19.1体外翻译和免疫沉淀

§19.2聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

§19.3 Western印迹分析法

§19.4蛋白质和RNA凝胶的银染色

20 一般的方法

§20.1 DNA和RNA的抽提和沉淀

§20.2塑料袋封口

§20.3光密度分析测量

§20.4凝胶或放射自显影的照相

§20.5放射自显影术

§20.6细菌生长平板的制作

§20.7噬菌体的滴度测定与铺板

21 特殊的方法

§21.1转基因小鼠制备

§21.2单克隆抗体生产：杂交瘤融合

§21.3标记探针与组织切片的原位杂交

§21.4克隆至酵母菌

附录1． 母液

§15.2插入片断的亚克隆与连接中的pBR

2．酶类

3． 提供试剂和仪器的主要厂商