第1章　实验前后的注意事项和行为准则

1.1 实验过程中的注意事项

1.1.1 实验前的注意事项

1.1.2 实验中的注意事项

1.1.3 实验后的注意事项

1.2　实验室成员的基本素质与行为准则

1.3　实验中的一些技巧及心得

1.3.1 提取高质量的RNA的技巧

1.3.2 细胞冻存及复苏

1.3.3　稳定转染后的检测方法

1.3.4　连接转化实验心得

1.3.5 Western Blot

参考文献

第一部分　DNA相关的操作

第2章　质粒DNA的相关实验

2.1 质粒DNA的分离与纯化

2.1.1 概述

2.1.2 实验材料、仪器和试剂

2.1.3 实验原理、操作步骤和实验要点

2.2 DNA酶切与电泳分析

2.2.1 概述

2.2.2 实验材料、仪器和试剂

2.2.3 实验原理、操作步骤和实验要点

2.3　重组质粒的连接、转化及筛选

2.3.1 概述

2.3.2 实验材料、仪器和试剂

2.3.3 实验原理、操作步骤和实验要点

参考文献

第3章　聚合酶链式反应

3.1 标准PCR反应和扩增产物克隆

3.1.1 概述

3.1.2 实验材料、仪器和试剂

3.1.3 实验原理、操作步骤和实验要点

3.2 反转录PCR(RT-PCR)

3.2.1　概述

3.2.2 实验材料、仪器和试剂

3.2.3 实验原理、操作步骤和实验要点

3.3 出错PCR（致突变PCR）

3.3.1 概述

3.3.2 实验材料、仪器和试剂

3.3.3 实验原理、操作步骤和实验要点

3.4 基于重叠延伸PCR的DNA合成技术

3.4.1 概述

3.4.2 实验材料、仪器和试剂

3.4.3 实验原理、操作步骤和实验要点

参考文献

第4章　限制性内切酶的特性及应用

4.1 概述

4.2　实验方案

4.2.1 单限制性内切酶对单DNA样品的消化

4.2.2 消化多个DNA样品

4.2.3 多限制性内切酶消化DNA样品

4.2.4 限制性内切酶对DNA的部分消化

4.2.5 DNA的甲基化

4.3　相关知识

4.3.1 背景知识

4.3.2　关键因素

4.3.3 时间安排

4.3.4　预期结果

参考文献

第5章　基因组DNA的提取

5.1 动物组织基因组DNA的提取

5.1.1 概述

5.1.2 实验材料

5.1.3 实验步骤

5.1.4　关键因素

5.1.5 常见问题

5.1.6 所需时间

5.1.7　本节溶液配制

5.2　植物组织基因组DNA的提取

5.2.1 基本方案——氯化铯离心法

5.2.2 备选方案——CTAB法

5.3 人白细胞DNA的提取

5.3.1 概述

5.3.2 实验材料

5.3.3 实验步骤

5.3.4　关键因素

5.3.5 所需时间

5.4　DNA琼脂糖凝胶电泳及回收

5.4.1 琼脂糖凝胶分离DNA

5.4.2 基本方案1——DNA电洗脱

5.4.3　基本方案2——NA-45纸电泳法

5.4.4　基本方案3——用低熔点琼脂糖凝胶分离DNA片段

5.4.5 备选方案1——使用β-琼脂糖酶从低熔点琼脂糖中回收DNA

5.4.6 备选方案2——用玻璃珠法从低熔点琼脂糖中回收DNA

5.4.7　本节溶液配制

5.5　非变性聚丙烯酰胺胶电泳及DNA回收

5.5.1 基本方案

5.5.2　备选方案——通过电洗脱从聚丙烯酰胺凝胶纯化片段

参考文献

第6章　分子探针及Southern杂交

6.1　探针的种类及其选择

6.1.1　探针的概念

6.1.2　探针的种类及其选择

6.2　探针标记物的种类及其选择

6.2.1 核素标记物

6.2.2　非放射性标记物

6.3　探针标记方法及其选择

6.3.1 双链DNA探针标记方法

6.3.2 单链DNA探针标记方法

6.3.3 末端标记DNA探针

6.3.4　寡核苷酸探针标记方法

6.3.5 RNA探针

6.4　探针的纯化

6.4.1 乙醇沉淀法

6.4.2　Sephadex G-50柱层析法

6.4.3　微柱离心法

6.5　Southern杂交

6.5.1 实验原理

6.5.2　基因组Southern Blot步骤

6.5.3 背景信息

6.5.4　关键参数

6.5.5 问题解决方法

6.5.6　预期结果

6.5.7 时间控制

6.5.8 优化方案

参考文献

第7章　基因组DNA的突变分析

7.1 概述

7.2　实验方案

7.2.1 PCR产物单链构象多态分析（PCR-single-strand Conformation Polymorphism,PCR-SSCP）

7.2.2 PCR-异源双链构象分析法（PCR-heteroduplex Analysis,PCR-HA）

7.2.3 PCR产物直接测序

7.2.4 PCR-限制性片段长度多态性分析（PCR-restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP）

7.3 相关知识

7.3.1 背景知识

7.3.2 关键因素

7.3.3 时间安排

7.3.4　预期结果

参考文献

第二部分　RNA相关的操作

第8章 RNA的提取和cDNA合成

8.1 概述

8.2　组织或细胞的总RNA提取

8.2.1 细胞或者组织样品匀浆处理

8.2.2 RNA的抽提

8.2.3 RNA定量

8.2.4 RNA凝胶电泳

8.2.5　保温实验

8.2.6　材料与试剂

8.2.7 相关知识

8.3　mRNA的分离与纯化

8.3.1 装柱与平衡柱子

8.3.2 柱上吸附poly(A+)RNA

8.3.3 从柱中洗脱poly(A+)RNA

8.3.4 Oligo(dT)-纤维素再生

8.3.5　材料与试剂

8.3.6 相关知识

8.4 cDNA的合成

8.4.1 cDNA第一链的合成

8.4.2 cDNA第二链的合成

8.4.3 cDNA合成产物定量分析

8.4.4 cDNA合成产物电泳分析

8.4.5　材料与试剂

8.4.6　相关知识

参考文献

第9章　寻找差异表达基因方法——SSH法

9.1 概述

9.2　实验方案

9.2.1 RNA提取和cDNA合成

9.2.2　Rsa I酶切消化

9.2.3　寡聚核苷酸接头（Adaptor）连接

9.2.4 第一次消减杂交

9.2.5 第二次消减杂交

9.2.6　PCR扩增

9.2.7 克隆消减cDNA文库

9.3　材料与试剂

9.3.1 试剂

9.3.2　仪器设备

9.4　相关知识

9.4.1 背景知识

9.4.2 关键因素

9.4.3 时间安排

9.4.4　预期结果

参考文献

第10章　全长基因的克隆——SMART技术

10.1 概述

10.2　实验方案

10.2.1 第一链cDNA合成

10.2.2 LD PCR扩增cDNA

10.2.3 蛋白酶K的消化

10.2.4　Sfi I酶切消化

10.2.5 通过CHROMA SPIN-400使cDNA链分段

10.2.6 连接cDNA到载体中

10.2.7 细菌的培养

10.2.8 滴定未扩增的文库

10.2.9 测定重组率

10.2.10 文库扩增

10.2.11 滴定扩增文库

10.3　材料与试剂

10.3.1 试剂

10.3.2　仪器设备

10.4　相关知识

10.4.1 背景知识

10.4.2 关键因素

10.4.3 时间安排

10.4.4　预期结果

参考文献

第11章 Northern Blot技术

11.1 概述

11.2　实验方案

11.2.1 经甲醛变性处理后进行的RNA电泳

11.2.2 变性RNA在膜上的转移和固定

11.2.3　探针标记

11.2.4 杂交和放射自显影

11.3　材料与试剂

11.3.1 试剂

11.3.2　仪器设备

11.4　相关知识

11.4.1 背景知识

11.4.2 关键因素

11.4.3 时间安排

11.4.4　预期结果

参考文献

第12章　siRNA的应用

12.1 概述

12.2　实验方案

12.2.1 siRNA设计

12.2.2　转录模板制备

12.2.3 dsRNA合成

12.2.4 siRNA制备和纯化

12.3　材料与试剂

12.3.1 试剂

12.3.2　仪器设备

12.4　相关知识

12.4.1 背景知识

12.4.2 关键因素

12.4.3 时间安排

12.4.4　预期结果

参考文献

第13章　RNA酶保护实验

13.1 概述

13.2　实验方案

13.2.1 制备标记的单链反义RNA探针

13.2.2 RNA杂交

13.2.3 RNA酶消化

13.2.4　凝胶电泳和放射自显影

13.3　材料与试剂

13.3.1 试剂

13.3.2　仪器设备

13.4　相关知识

13.4.1　背景知识

13.4.2　关键因素

13.4.3 时间安排

13.4.4　预期结果

参考文献

第三部分　蛋白质相关的操作

第14章　蛋白质分离、鉴定相关技术

14.1 蛋白的双向电泳

14.1.1 样品的准备

14.1.2 电泳

14.1.3 蛋白的检测

14.1.4 问题解决及关键因素

14.1.5 时间花费

14.1.6 背景信息

14.2 酶联免疫吸附测定法（ELISA）

14.2.1 实验原理

14.2.2　材料与试剂

14.2.3 背景知识

14.2.4 影响因素

14.2.5 问题解决

14.2.6 时间安排

14.2.7 预期结果

14.3　Western印迹法

14.3.1 实验原理

14.3.2　材料、试剂和仪器

14.3.3　试剂的配制方法

14.3.4　方法与步骤

14.3.5 背景信息

14.3.6 问题解决

14.3.7　关键因素

14.3.8 时间花费

参考文献

第15章　染色质免疫沉淀技术（ChIP）

15.1 概述

15.2　实验方案

15.2.1 甲醛交联细胞

15.2.2 染色质超声断裂

15.2.3 免疫沉淀蛋白和DNA复合物

15.2.4 收获免疫复合物（抗体-蛋白质-DNA）

15.2.5　洗脱免疫复合物

15.2.6　去除甲醛交联

15.2.7 DNA纯化

15.2.8 染色质免疫沉淀DNA的分析和蛋白质在DNA上结合位点的鉴定

15.3　材料试剂

15.3.1 试剂

15.3.2　仪器设备

15.4　相关知识

15.4.1 背景知识

15.4.2　关键因素

15.4.3 时间安排

15.4.4　预期结果

参考文献

第16章　蛋白复合体的分离与鉴定

16.1 Yoshihiro Nakatani的研究方法（Sasaki,Mello et al.,2009）

16.1.1 稳定表达目的蛋白的载体系统

16.1.2　逆转录病毒载体转染包装细胞

16.1.3　逆转录病毒的转导

16.1.4　转导阳性细胞的分选

16.1.5 带有表位标签外源蛋白表达的检测

16.1.6　细胞的大规模培养

16.1.7 细胞不同组分的分离

16.2　分离蛋白复合体的具体操作

16.2.1 MAML1内源性蛋白复合体的分离

16.2.2 免疫亲和纯化MAML1蛋白复合体的实验操作

16.2.3 其他蛋白复合体的实验操作

16.2.4　后续实验操作的具体实验方案

参考文献

第17章　免疫沉淀

17.1 实验原理

17.2　仪器、材料和试剂

17.2.1 裂解缓冲液

17.2.2　其他试剂

17.2.3　仪器和材料

17.3　方法与步骤

17.3.1 裂解产物的准备

17.3.2　裂解液的预处理

17.3.3　免疫沉淀

17.4　背景知识

17.5　关键参数

17.5.1　抗原的提取

17.5.2　抗体的产量

17.5.3 多抗单抗的选择

17.5.4　抗体滴度

17.5.5　免疫吸附剂

17.5.6 非特异性对照的设立

17.5.7 洗涤

17.6　问题解决

17.6.1 非特异性条带

17.6.2 分离胶高背景

17.6.3　轻链重链显示

17.7　预期结果

17.8 时间花费

17.9　注意事项

17.9.1　抗体的性质

17.9.2　缓冲液的性质

17.9.3 防止蛋白变化

17.9.4　抗体／缓冲液的比例

17.10　抗体与Beads配对表

参考文献

第18章　免疫荧光染色技术

18.1 概述

18.2　实验原理

18.3　仪器、材料和试剂

18.4　方法与步骤

18.4.1 制片

18.4.2 固定

18.4.3 水洗

18.4.4 染色

18.5　预期结果

18.6　背景知识

18.7　关键参数

18.8　问题解决

18.9　时间花费

18.10　标本保存

18.11 注意事项

18.12　非特异性染色的消除方法

18.12.1 主要原因

18.12.2 消除方法

18.13　常用固定方法与试剂

参考文献

第四部分　细胞生物学相关的操作

第19章　外源基因在原核生物中的表达

19.1　概述

19.2　实验方案

19.2.1 外源基因的诱导表达

19.2.2 大肠杆菌包含体的分离与蛋白质纯化

19.3　材料试剂

19.3.1　诱导表达材料

19.3.2 大肠杆菌包含体的分离与蛋白纯化材料

19.4　背景知识

19.5　关键因素及注意事项

19.5.1　表达前的准备要素

19.5.2　获得目的基因

19.5.3　构建重组表达载体

19.5.4 包含体的纯化

19.6　时间安排

参考文献

第20章　外源基因在真核细胞中的表达

20.1 真核细胞常用表达载体

20.1.1 pCMVp-NEO-BAN载体

20.1.2　pEGFP：增强型绿色荧光蛋白表达载体

20.1.3 pEGFT-Actin：增强型绿色荧光蛋白／人肌动蛋白表达载体

20.1.4　pSV2表达载体

20.1.5 CMV4表达载体

20.1.6　其他常用克隆Vector

20.2　外源基因导入哺乳动物细胞中的技术方法

20.2.1 磷酸钙细胞转染技术

20.2.2 电穿孔转染法

20.2.3 脂质体介导DNA转染法

20.2.4　病毒载体介导的基因转移

20.2.5 DEAE-葡聚糖法

参考文献

第21章　转基因植物

21.1 植物组织培养所需母液的配制

21.1.1 实验用具和药品

21.1.2 配制内容与步骤

21.1.3 注意事项

21.2　原生质体分离

21.2.1 仪器、材料和试剂

21.2.2　方法与步骤

21.3　植物转基因技术

21.3.1 植物转基因技术的基本路线

21.3.2　转基因的受体系统

21.3.3 外源基因导入植物的方法

21.4　转基因植物的筛选与检测

21.4.1 抗性基因

21.4.2　显色或发光报告基因

21.4.3　分子生物学检测方法

21.5　改进转基因的技术

21.5.1 转基因植物中外源基因的沉默

21.5.2　提高外源基因表达水平的策略

参考文献

第22章　转基因动物技术

22.1　显微注射法

22.1.1 实验原理

22.1.2　基本步骤

22.1.3 　实验详细步骤

22.1.4 时间花费

22.1.5 关键参数及问题解决

22.2　胚胎干细胞方法

22.2.1 实验原理

22.2.2　ES细胞的建立与维持

22.2.3　ES细胞的基因组操作

22.2.4　转基因ES细胞的筛选——正负选择法

22.2.5 转基因ES细胞的检测

22.2.6　转基因小鼠的繁育

22.2.7　获得纯合的转基因鼠

22.2.8　本法优劣

22.3　反转录病毒法

22.3.1 反转录病毒感染法的原理

22.3.2　反转录病毒感染法的载体构建

22.3.3 通过物理方法将重组DNA分子转入包装细胞

22.3.4　本法优劣

22.4　其他方法

22.4.1　精子载体法

22.4.2　体细胞核移植法

22.4.3　受体介导法

参考文献

第23章　细胞凋亡的分子生物学检测方法

23.1 概述

23.2　实验方案

23.2.1 形态学观察

23.2.2　磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法）

23.2.3 Caspase-3活性的检测

23.2.4 DNA琼脂糖凝胶电泳检测法

23.2.5 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记检测法（TUNEL检测法）

23.3　材料试剂

23.3.1 形态学观察

23.3.2　磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法）

23.3.3 Caspase-3活性的检测

23.3.4 DNA琼脂糖凝胶电泳检测法

23.3.5 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记检测法（TUNEL检测法）

23.4　背景知识

23.4.1 电镜检测法

23.4.2　磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V检测法）

23.4.3 Caspase-3活性的检测

23.4.4 DNA琼脂糖凝胶电泳检测法

23.4.5 脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记检测法（TUNEL检测法）

23.5　关键因素及注意事项

23.5.1 Annexin V检测法注意事项

23.5.2　Caspase-3活性检测

23.5.3 TUNEL检测法常见问题及解决方法

23.6　时间安排

23.7　预期结果

参考文献

附录　分子生物学实验室安全及注意事项