第一章 脑血管病概述

一、脑血管病的概念和流行病学

二、脑血管病分类

三、脑血液循环调节及病理生理

四、脑的血管

五、脑血管病的病因

六、脑血管病的危险因素与预防

第二章 急性脑缺血模型

第一节 局灶性脑缺血模型

一、大鼠局灶性脑缺血模型

二、小鼠局灶性脑缺血模型

三、家兔局灶性脑缺血模型

第二节 全脑缺血模型

一、大鼠全脑缺血模型

二、小鼠全脑缺血模型

三、家兔全脑缺血模型

第三节 TIA模型

一、TIA模型的分类

二、TIA模型的评价标准

三、常用TIA模型的制作

第四节 脑缺血模型神经功能损伤的评价方法

一、运动、平衡功能评价

二、感觉功能评分法

第五节 脑梗死体积的评价方法

一、TTC染色测定脑梗死体积

二、苏木精-伊红染色法测定脑梗死体积

三、焦油紫染色

四、磁共振成像

第三章 慢性脑缺血模型

第一节 慢性脑缺血模型的制作方法

一、大鼠慢性脑缺血实验动物模型

二、小鼠慢性脑缺血实验动物模型

三、其他动物

第二节 神经功能评价

一、总体状态

二、记忆功能评定

第三节 神经损伤的评价

一、监测脑血流

二、神经电生理改变

三、P300的测定

四、眩晕潜伏期测定

五、苏木精-伊红染色

第四章 脑出血模型

第一节 脑出血模型的制作方法

一、实验动物的选择及出血部位选择

二、大鼠脑出血模型的制作

三、兔脑出血模型

四、脑出血模型制作技巧

五、脑出血模型制作的有关问题

第二节 脑出血模型的行为学评价

一、Bederson评分

二、平衡木行走试验

三、肌力测验

四、前肢放置检测

第三节 血肿的评定及组织学观察

一、头颅磁共振扫描

二、CT灌注成像

三、组织学观察

第五章 蛛网膜下隙出血模型

第一节 SAH动物模型的制作方法

一、脑池注血法

二、颅内动脉穿刺法

三、动脉周围置血法

第二节 神经功能评价方法

一、平衡木实验

二、转棒实验

三、抓握牵引实验

四、走横木实验

五、Bederson评分法

六、Kaoutzanis 11分评分法

七、Garcia 18分评分法

八、Katz 100分评分法

九、Morris水迷宫实验

十、Endo4级评价法

第三节 神经损伤的评价方法

一、大体病理观察

二、病理学检查

三、脑含水量测定

四、脑血流量的测定

五、常规生理参数的监测

六、血-脑屏障通透生的测定

七、大脑动脉血管截面积测量

八、磁共振成像扫描

九、经颅多普勒

十、数字减影血管造影

十一、三维CT血管造影

第六章 小动物脑的整体实验方法

第一节 激光多普勒检测脑血流

一、激光多普勒检测局部脑血流

二、激光多普勒检测特定位点的脑血流

第二节 高速摄像检测细静脉管径及红细胞流速动态观察

大鼠和小鼠软脑膜细静脉管径和红细胞流速动态观察

第三节 活体观察软脑膜细静脉血栓形成的动态变化

一、光化学刺激诱导小鼠脑细静脉血栓形成

二、ADP表面滴加诱导小鼠脑细静脉血栓的形成

第四节 脑血管新生的观察

一、可视化颅窗法观察脑血管形态变化

二、同步辐射X射线检测小动物脑微血管

第五节 活体观察脑血管通透性的动态变化

一、伊文思蓝法检测血-脑屏障通透性

二、FITC荧光标记的白蛋白在大鼠软脑膜细静脉漏出动态的连续观察

第六节 活体观察在微脑血管白细胞滚动及黏附的动态变化

第七章 标本的留取方法

第一节 血液的采集

一、眼眶采血法

二、尾部采血法

三、心脏采血法

四、大动脉血管采血法

五、静脉采血法

六、采血时的注意事项

第二节 脑脊液采集方法

一、大小鼠脑脊液的采集

二、家兔脑脊液的采集

第三节 外周血免疫细胞的分离

一、外周血中中生粒细胞、淋巴细胞、单核

细胞的分离

二、外周血中血小板的分离

第四节 脑组织单细胞悬液的制备方法

一、脑组织单细胞悬液的制备方法

二、流式细胞术急性分离小鼠小胶质细胞

第五节 脑组织石蜡切片的制备

第六节 脑组织冰冻切片的制备

第七节 脑组织电镜标本的制备

第八节 脑组织蛋白的提取

一、脑组织取材

二、总蛋白提取

三、脑组织的膜蛋白、浆蛋白、核蛋白的提取

第九节 脑组织微血管的分离

第十节 脑组织线粒体的分离

一、二次蔗糖密度梯度离心纯化线粒体

二、试剂盒方法

第八章 脑血管病研究的在体实验方法

第一节 苏木精-伊红（HE）染色

一、石蜡切片的HE染色

二、冰冻切片的HE染色

第二节 尼氏染色观察神经元

一、焦油紫染色（石蜡切片）

二、甲苯胺蓝染色（石蜡切片）

三、改良后的甲苯胺蓝染色方法（石蜡切片）

四、硫堇染色（石蜡切片）

第三节 镀银法染色观察神经元纤维

一、Golgi-COX染色（可用石蜡或冰冻切片）

二、Cajal法神经原纤维镀银染色（可用石蜡或冰冻切片）

第四节 神经胶质细胞特异染色

一、Holzer神经胶质纤维染色方法（石蜡切片）

二、Penfield胶质细胞染色（冰冻切片）

三、改良的Holzer神经胶质纤维染色方法

第五节 神经髓鞘的特异染色

一、Luxol Fast Blue染色（冰冻切片）

二、多内给（Donaggio）法

三、玛气（Marchi）法

第六节 脑组织的TUNEL染色

一、石蜡切片的TUNEL荧光染色

二、冰冻切片的TUNEL荧光染色

第七节 脑组织的细胞增殖BrdU染色

第八节 脑组织的过氧化物DHE染色

一、利用荧光探针直接测定脑组织冰冻切片活生氧的形成

二、利用荧光探针直接测定线粒体活性氧的形成

第九节 脑内的淀粉样物质的染色

一、甲基紫法（石蜡切片）

二、刚果红甲醇法（石蜡切片）

三、改良刚果红甲醇法（石蜡切片）

第十节 免疫组织化学及免疫荧光化学

一、免疫组化（石蜡切片）

二、免疫组化（冰冻切片）

三、免疫荧光（石蜡切片）

四、免疫荧光（冰冻切片）

第十一节 酶联免疫吸附剂测定ELISA

第十二节 免疫印迹

第十三节 免疫共沉淀

第十四节 DNA的提取及PCR鉴定转基因小鼠基因表型

第十五节 RNA的提取及Rea1-time PCR

第十六节 DNA与蛋白质相互作用分析

第十七节 脑组织切片的原位杂交

第九章 脑血管病研究的离体实验方法

第一节 细胞培养室的基本条件及设备

一、细胞培养室布局规划

二、细胞培养基本设备

第二节 无菌操作

一、细胞培养室及相关设备的常规灭菌消毒

二、常用器皿清洗

三、各类实验用品的无菌处理

四、基本无菌操作技术及要求

五、常见污染种类及解决办法

第三节 常用液体配置

一、培养用液

二、培养基

三、抗生素

四、抗有丝分裂剂

第四节 细胞培养基本技术

一、原代培养

二、神经组织常见细胞系

三、细胞传代

四、细胞生长状态的观察

五、细胞冻存、复苏与运输

第五节 正常神经组织常见类型细胞的原代培养

一、神经元

二、脑微血管内皮细胞

三、小胶质细胞

四、星形胶质细胞

五、少突胶质细胞

六、神经干细胞

七、脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养建立体外血-脑屏障

第六节 脑血管病常见离体细胞模型制作

一、氧糖剥夺模型

二、凝血酶模拟急性脑出血模型

三、过氧化氢氧化应激损伤模型

四、兴奋性氨基酸损伤模型

五、炎症损伤模型

第七节 常用细胞分析检测

一、细胞活性实验

二、细胞凋亡实验

三、细胞迁移实验

四、细胞增殖实验

五、细胞周期实验

六、细胞形态学实验

第八节 脑血管病常用的电生理技术

一、膜片钳记录标本的制备

二、膜片钳电生理记录

第十章 非人灵长类动物脑血管病模型

第一节 动物模型的制作

一、基本准备和麻醉

二、MCAO（middle cerebral artery occlusion）模型制作和术后护理

三、自体抗凝血制备脑出血模型

四、蛛网膜下隙出血模型

五、磁共振扫描

六、组织学检测

第二节 非人灵长类动物模型的研究现状和评价

一、伦理问题

二、非人灵长类动物脑卒中模型的设计

第十一章 脑血管病转化医学研究的现状